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生物玻片具體制作方法

來源:http://www.scwdh.com/    日期:2019-02-27    瀏覽量:載入中...

生物切片從制作的方法來分,有涂片、壓片、裝片(也叫整裝法)、磨片和切片等。下面,小編將給大家講解幾種制作切片的方法,以及怎樣對切片的載玻片進行處理。
載玻片是用顯微鏡觀察東西時用來放東西的玻璃片或石英片,制作樣本時,將細胞或組織切片放在載玻片上,將蓋玻片放置其上,用作觀察。蓋玻片是蓋在載玻片上的材料上的,可以避免液體和物鏡相接觸,以免污染物鏡,并且可以使被觀察的細胞上方處于同一平面,即:距離物鏡距離相同,使觀察到的圖像更清晰。
載玻片的處理
① 將玻片插入染色架,加入含中性洗滌劑熱水中處理至過夜;
② 用流水沖洗、晾干后,置清潔液中浸泡48h;
③ 用流水沖洗干凈,去離子水漂洗,晾干,干熱180℃處理3h;
④ 無水乙醇脫水30min,晾干;
⑤ 配3×SSC、1×Denhardt“s液,加熱至65℃,將載玻片浸在上述液體中處理3h;
⑥ 冷卻后除去上述液體,用去離子水漂洗1min;
⑦ 3∶1(乙醇:冰醋酸)浸育20min,晾干;
⑧ 在2%氨丙基三乙氧基甲硅烷(APES)中浸10秒,丙酮輕洗,焦碳酸二乙酯(DEPC)處理水洗后,42℃溫箱過夜,干燥,貯存備用。

生物玻片
一、切片法
1、徒手切片法
徒手切片法簡單省時,容易掌握,雖有一定局限性,但至今在生物學教學中仍然是觀察形態構造的一種基本切片方法。徒手切片分選材、持物、切片、取片、選片和裝片等步驟。
2、石蠟切片法
石蠟切片法所使用的支持劑是石蠟,優點是切下的片子薄而勻,還能作連續切片,但制作手續較復雜,具體可分為固定、沖洗、脫水、染色、浸蠟、切片、透明和封藏八步進行操作。
3、火棉膠切片法
火棉膠切片法所使用的支持劑是火棉膠。這種方法的優點是包埋過程不經高溫,可以避免組織收縮及變脆,適用精細材料(如腦)的切片,也因火棉膠有韌性,切片不致有折卷或破裂,適于大塊組織及多空洞的組織(如腦、眼球)的切片。
其操作時間短并且步驟簡單,所以不易出現組織脫片情況,但是這種方法不能普遍應用于全部基礎實驗和臨床病理診斷中,不處理的玻片直接使用,組織脫片情況非常嚴重,甚至會造成研究的中斷,而直接購買已經處理過的玻片不僅價格昂貴,而且處理效果不一致,所以多數研究人員選擇自己處理玻片。
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